青光安颗粒含药血清对体外高压培养人小梁细胞凋亡影响及其与Caspase-3、Caspase-8表达的关系
作者：
曾志成
| 中文题名 |
青光安颗粒含药血清对体外高压培养人小梁细胞凋亡影响及其与Caspase-3、Caspase-8表达的关系 |
| 英文题名 |
Influence for Apoptosis of Pressurized Human TrabecularCells Cultured in Vitro after Intervention of Serum Containing Qing-guang-an Grains And its Relationship with Caspase-3、Caspase-8 Expression |
| 作者 |
曾志成 |
| 单位 |
湖南中医药大学 |
| 专业 |
中西医结合临床 |
| 研究方向 |
中医药防治青光眼研究 |
| 导师 |
彭清华教授 |
| 学位级别 |
硕士 |
| 答辩日期 |
2008年05月25日 |
| 摘要 |
目的 1. 制备不同浓度青光安颗粒含药血清。2. 培养、传代人小梁细胞并建立体外高压模型。3. 初步探讨青光安颗粒含药血清对体外加压后人小梁细胞凋亡的影响及其与Caspase-3、Caspase-8蛋白酶表达的关系。方法 1. 随机将60只SD大鼠分组，进行灌胃，以获取青光安2.5倍、5倍、10倍、20倍含药血清，益脉康5倍含药血清以及不含药大鼠血清。2. 建立人小梁细胞体外高压模型。3. MTT法检测经不同含药血清作用后加压人小梁细胞的活性。取加压人小梁细胞接种到培养板中，加入不同含药血清，分别检测不同药物与浓度含药血清组不同时间段细胞的OD值。4. TUNEL技术检测不同含药血清作用后加压人小梁细胞的凋亡指数，免疫组化检测不同含药血清作用后加压人小梁细胞Caspase-3、Caspase-8蛋白酶的表达指数。5. 流式细胞仪检测不同含药血清作用后加压人小梁细胞的凋亡率和Caspase-3、Caspase-8蛋白表达率。结果 1. 成功获取含药血清，并将其作用于体外加压的人眼小梁细胞。2. 成功制备体外加压的人眼小梁细胞。3. MTT法发现，OD值与不同药物含药血清有关，还与作用时间有关。青光安5倍、10倍、20倍组和益脉康5倍组都能够明显提高细胞OD值，与空白组比较差异有显著统计学意义（P＜0.01）；青光安10倍、20倍组与益脉康5倍组组比较差异有显著统计学意义（P＜0.01），但是青光安5倍组与益脉康5倍组组之间比较差异没有统计学意义（P＞0.05）；青光安10倍组与20倍组之间比较差异没有统计学意义（P＞0.05）；培养24h、36h的OD值明显高于培养12h的OD值，比较差异有显著统计学意义(P< 0.01)，但是培养24h与培养36h时间段之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。4. TUNEL技术、免疫组化检测、流式细胞仪检测共同发现青光安5倍、10倍、20倍组和益脉康5倍组都可以明显抑制加压人小梁细胞的凋亡和Caspase-3、Caspase-8蛋白酶的表达，与空白组比较差异有显著统计学意义（P＜0.01）；与益脉康5倍组比较，青光安5倍组差异无统计学意义（P＞0.05），青光安10倍、20倍组差异有统计学意义（P＜0.05）；与青光安10倍组比较，青光安5倍组、益脉康5倍组的凋亡和Caspase-3、Caspase-8蛋白酶表达都较高，比较差异有统计学意义（P＜0.05），青光安20倍组差异无统计学意义（P＞0.05）。5. 根据流式细胞仪检测结果统计发现各组加压后人小梁细胞Caspase-3蛋白表达率与凋亡率的决定系数（R2）为0.784；Caspase-8蛋白表达率与凋亡率的决定系数（R2）为0.813。结论 1. 青光安颗粒含药血清能提高加压人小梁细胞活性、抑制其凋亡。2. 青光安颗粒含药血清能抑制加压人眼小梁细胞Caspase-3、Caspase-8蛋白酶的激活与表达。3. 青光安颗粒含药血清抑制加压人小梁细胞凋亡可能主要是通过抑制细胞Caspase-3、Caspase-8蛋白酶激活的途径而起作用。 |
| 关键词 |
青光安颗粒; 含药血清; 人小梁细胞; 凋亡; Caspase-3; Caspase-8 |
